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更新時(shí)間:2023-01-11
簡(jiǎn)要描述:
禽白血病是由禽C型反錄病毒群的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱,主要是淋巴細(xì)胞性白血病,其次是成紅細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)胞性白血病。此外還可引起骨髓細(xì)胞瘤、結(jié)締組織瘤、上皮腫瘤、內(nèi)皮腫瘤等。大多數(shù)腫瘤侵害造血系統(tǒng),少數(shù)侵害其他組織
禽白血病病毒(ELISA法)檢測(cè)試劑盒
本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測(cè)。 本試劑盒是采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(DAS-ELISA)原理來檢測(cè)禽白血病病毒的P27抗原。檢測(cè)時(shí),在相應(yīng)的反應(yīng)孔中加入陰、陽對(duì)照品和待測(cè)樣品,經(jīng)溫育后,若樣品中含有P27抗原,則與酶標(biāo)板上的抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物,反之則不能結(jié)合。洗滌后,加入的酶標(biāo)記物與包被板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合。再次洗滌后加入底物,酶催化底物反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色,顏色深淺與樣品中P27抗原的含量成正相關(guān),從而達(dá)到快速檢測(cè)的目的。
操作方法
一:禽白血病病毒(ELISA法)檢測(cè)試劑盒試劑配制
a)0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液:準(zhǔn)確稱取氯化鈉 8.0 g、磷酸氫.二鈉1.14 g和磷酸.二氫鉀0.24 g,加入去離子水溶解并定容至1 L。
b)洗滌工作液:使用前,濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫(20-25℃),并搖動(dòng),使沉淀溶解(*在37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5-10 min),然后用蒸餾水作25 倍稀釋(例如:30 mL 的濃縮洗滌液加上 720 mL 蒸餾水)勻,稀釋好的洗滌液2-8℃可存放7日。
二:禽白血病病毒(ELISA法)檢測(cè)試劑盒樣品處理
蛋清:取全蛋,破碎后,直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子:取棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣,然后放入1 mL PBS溶液(0.01mol/L,pH 值 7.4)中,-20℃以下冰箱中凍融一次,待其恢復(fù)至室溫后,取 100 μL 進(jìn)行檢測(cè)。 疫苗:疫苗稀釋液將疫苗溶解,再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀釋10-20倍后,取100μL進(jìn)行檢測(cè)。 胎糞:無需稀釋,可以直接用于檢測(cè),若樣品中含有沉淀或雜質(zhì),需在2000-3000 r/min,離心 10 min,取 100 μL 上清進(jìn)行檢測(cè)。
三:操作步驟
取酶標(biāo)板(根據(jù)樣品*,可拆開分次使用),陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和待檢樣品各取100 μL加至相應(yīng)微孔中,蓋好蓋板膜,輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,充分混
勻,室溫下(25±2℃)避光反應(yīng)60 min。
注:陰、陽性對(duì)照各設(shè)2孔,待檢樣品設(shè)1孔。
禽白血病病毒(ELISA法)檢測(cè)試劑盒甩掉孔中的溶液,每孔加入稀釋好的洗滌液300μL,震蕩洗滌4次,每次30s 左右,在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。 每孔加入100μL酶標(biāo)記物工作液,蓋好蓋板膜,室溫下(25±2℃)避光反應(yīng)60 min。 棄去孔中的溶液,洗滌4次,方法同2。 底物A液與底物B液按1:1混合均勻,加入孔中,100 μL/孔,蓋上蓋板膜,室溫下(25±2℃)反應(yīng)15 min。
注:底物工作液也可提前配制,但配制完后需5 min內(nèi)使用。
每孔加入終止液100μL,5 min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
注:若終止液出現(xiàn)絮狀結(jié)晶,可37℃加熱,待其溶解后使用。
結(jié)果判定
在酶標(biāo)儀上讀各孔OD650nm值,計(jì)算出陰性對(duì)照孔OD均值NC和陽性對(duì)照孔OD均值PC。
注:NC值<0.200且0.500<PC值≤2.000,試驗(yàn)結(jié)果才有效。否則,應(yīng)進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。
按照公式計(jì)算出S/P值:S/P=(SC-NC)/(PC-NC)。
注:SC為被檢樣品孔OD值。
如果S/P<0.17,說明樣品中無禽白血病病毒P27蛋白;如果S/P≥0.17,說明樣品中有禽白血病病毒P27蛋白。
有效期
貯存方法: 2 - 8oC下貯存。
有效期: 12個(gè)月。
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