A型口蹄疫抗體檢測試劑盒用間接ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的FMD病毒抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有FMD病毒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶結(jié)合物,與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。
A型口蹄疫抗體檢測試劑盒注意事項:
試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2-8℃。
不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。
底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應(yīng)該注意防護。
TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。
檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。
所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得很好的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。
血清稀釋板為一次性用品,不得重復(fù)使用;血清稀釋板的大容量為300μl/孔。
A型口蹄疫抗體檢測試劑盒操作步驟:
取預(yù)包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設(shè)陰性對照和陽性對照各2孔,取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應(yīng)孔中輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。
蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育30分鐘。
小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)4-6次,后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同3。切記后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加顯色液100?l,輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。
每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。