口蹄疫A型抗體快速檢測(cè)卡采用夾心法設(shè)計(jì)。將膠體金顆粒標(biāo)記的純化口蹄疫病毒O型抗原1噴吐于結(jié)合墊上,干燥備用。而將純化的口蹄疫病毒O型抗原2和口蹄疫病毒O型抗體IgG調(diào)整至工作濃度,分別噴涂于NC膜的檢測(cè)帶(T)和質(zhì)控帶(C)上。稀釋好的樣品血清從樣品墊流向金標(biāo)成品膜。樣品中所含的抗體會(huì)在檢測(cè)帶的位置上與標(biāo)記的抗原結(jié)合發(fā)生相應(yīng)的反應(yīng)。質(zhì)控帶上發(fā)生的反應(yīng)用以確定試紙條上液體正確的流向。
一、口蹄疫A型抗體快速檢測(cè)卡試驗(yàn)方法:
1.撕開(kāi)檢測(cè)卡鋁箔包裝袋,取出檢測(cè)卡,放于平整、潔凈的臺(tái)面上。
2.用配套吸管吸取已準(zhǔn)備好的澄清樣本上清液,垂直而緩慢的滴加2-3滴(約60ul)到加樣孔內(nèi)。(全血樣本須4滴以上)
3.室溫下放置10-20分鐘判斷結(jié)果,超過(guò)30分鐘的結(jié)果無(wú)效。
二、口蹄疫A型抗體快速檢測(cè)卡操作步驟:
取預(yù)包被的檢測(cè)板(根據(jù)樣品多少,可拆開(kāi)分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各2孔,取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl分別加入反應(yīng)孔中輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。
蓋上封板膜(可按實(shí)際需要自行裁剪),置37℃溫育30分鐘。
小心揭開(kāi)封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)4-6次,后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
小心揭開(kāi)封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同3。切記后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加顯色液100?l,輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。
每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
三、口蹄疫A型抗體快速檢測(cè)卡結(jié)果判斷:
1.陰性:在觀察孔內(nèi),只有對(duì)照線(xiàn)區(qū)(C)出現(xiàn)一條紫紅色線(xiàn)。
2.陽(yáng)性:在觀察孔內(nèi),檢測(cè)線(xiàn)區(qū)(T)及對(duì)照線(xiàn)區(qū)(C)同時(shí)出現(xiàn)紫紅色線(xiàn)。