細胞培養(yǎng)過程中如果操作不當或者條件控制不合適見容易受到化學(xué)或者生物因素的污染,常見的污染源有:
1.細菌污染
細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染,即使在細胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素,也可能因為操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌,如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見。
培養(yǎng)細胞受細菌污染后,會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,pH改變。污染后細胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,zui后變圓脫落死亡。
2.真菌污染
真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種,zui常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培養(yǎng)細胞受真菌污染后,可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點,有的散在生長,培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁;倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養(yǎng)基中,有的呈鏈狀排列。
真菌污染后,細胞生長變慢,但zui后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。
3.支原體污染
支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的zui小微生物,zui小直徑0.2μm,一般過濾除菌無法去除它,光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn),能在偏堿條件下生存,對青霉素有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間。
培養(yǎng)細胞受支原體污染后,部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢,部分細胞變圓,從瓶壁脫落。但多數(shù)細胞污染后無明顯變化,或略有變化,若不及時處理,還會產(chǎn)生交叉污染。
4.病毒污染
組織細胞培養(yǎng)過程中,如果沒有除去潛在的病毒,就會產(chǎn)生病毒污染。目前,從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。
盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
5.非同種細胞污染
由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。